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| 货号 (SKU) | 包装规格 | 是否现货 | 价格 | 数量 |
|---|---|---|---|---|
| R749973-500U |
500U |
期货  |
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| R749973-2KU |
2KU |
期货 |
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| R749973-10KU |
10KU |
期货 |
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| 规格或纯度 | 不含DNase，不含其它RNA内切酶和外切酶活性。 |
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| 稳定性与储存 | -20℃保存，至少一年有效。 |
| 英文名称 | RNase R |
| 储存温度 | -20°C储存 |
| 运输条件 | 超低温冰袋运输 |
| 产品介绍 |
产品介绍： RNase R (Ribonuclease R)是由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于大肠杆菌的Mg2+', "依赖的3'→5'核糖核酸外切酶。RNase R能消化线性RNA (Linear RNA)，但不能消化环状RNA (Circular RNA, circRNA)、套索RNA (Lariat RNA)、3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA以及具有复杂二级结构的tRNA、5S RNA等1, 2]。RNase R常用于消化除去线性RNA，以获得环状RNA (也称环形RNA)、内含子套索(Intron lariat)等非线性RNA。RNase R为环状RNA的研究提供了极大的便利，也可以给研究RNA剪接(RNA splicing)带来很大的便利。套索RNA是在pre-mRNA的剪接内含子过程中产生的，经RNase R消化，可以从总RNA中被分离出来而用于后续研究。阿拉丁生产的RNase R不能消化环状RNA但可以消化线性RNA的效果请参考图1。图1. 阿拉丁生产的R7092 RNase R可以消化线性RNA但不会消化环状RNA的效果图。在20µl反应体系中含20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM MgCl2和100mM KCl，以长度为22nt的等摩尔数(4pmol，约0.03μg)的线性或环状RNA作为底物，并加入图中指定量的本产品或国外L公司(Competitor)的RNase R。37℃孵育30min，70℃孵育10min终止反应。随后加入4μl 6X DNA Loading Buffer ，95℃变性5min，然后取出15μl进行7M Urea 15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(室温条件下用0.5X TBE作为电泳液，180V电泳90min，NA-Red溶液(1000:1) 室温染色10min，拍照观察结果)。如图所示，本产品与国外L公司的产品相比，具有类似的消化效果。图中效果仅供参考，在不同实验条件下获得的效果可能会有所不同，图中效果仅供参考。用途： 环状RNA研究，环状RNA中去除线性RNA，可变剪接研究，内含子套索序列的分析和鉴定等。来源： 由大肠杆菌表达，表达基因为E.coli RNase R基因。酶储存溶液： 50mM Tris-HCl (pH7.5 @25℃), 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100。10XReaction Buffer：200mM Tris-HCl (pH8.0 @25℃), 1M KCl, 1mM MgCl2.失活或抑制： 70℃加热10分钟可使RNase R失活。注意事项： RNase R需要适当的镁离子浓度(0.1-1.0mM)才能发挥活性；反应体系中存在EDTA等可以螯合镁离子的螯合剂时，会显著降低RNase R活性。有必要时，可以考虑额外添加MgCl2使反应体系中游离的镁离子浓度至少达到0.1mM以上，以确保螯合剂不会螯合镁离子而影响酶活性。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。\t'],使用说明： 1.RNase R的消化反应。a.参考下表在冰上配制如下反应体系： Reagent Volume/Concentration RNA ＜5µg ＞5µg 10X RNase R Reaction Buffer 2µl 5µl RNase R (20U/µl) 1-3U/µg RNA 1-3U/µg RNA DEPC-treated Water up to 20µl up to 50µl b.反应条件：37℃反应10-30min，70℃灭活10min。注：RNase R的用量和反应体系的体积需要根据具体情况，通过实验进行摸索调整。2.RNase R消化反应后，反应体系中环状RNA等的纯化回收。a.苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀纯化回收环状RNA等。 (a)加入Nuclease-free Water将反应体积放大到180μl，再加入20μl 3M醋酸钠(pH5.2)或20μl 5M醋酸铵，充分混匀。加入等体积的苯酚/氯仿混合液(1:1)抽提一次(剧烈Vortex 20-30s，随后12000rpm离心5-10min取上清。(b)加入双倍体积的无水乙醇沉淀RNA，在-20℃至少孵育30分钟。随后12000rpm 4℃离心5-10min沉淀RNA。(c)弃上清，用约500μl预冷的70%乙醇洗涤沉淀，以充分去除盐分。 (d)用DEPC-treated Water 重悬并溶解RNA，在-80℃储存。b.使用RNA纯化柱或RNA纯化磁珠进行纯化回收。经过RNase R消化后的产物可以在70℃孵育10 min使酶失活后，通常无须进行纯化，就可以直接进行反转录，用于后续的RT-PCR、qPCR等。参考文献： 1. Suzuki, H. et al., Nucl Acids Res. 2006; 34(8):e63.2. Vincent, H.A. and Deutscher, M.P., J Biol Chem. 2006; 281(40):29769.One unit converts 1μg of poly-r(A) into acid-soluble nucleotides in 10 minutes at 37℃ in 20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM KCl and 0.1mM MgCl2. Application： Circular RNA studies; linear RNA removal from circular RNA; alternative splicing studies; analysis and identification of intron lariat sequences, etc.Source： E.coli RNase R expressed and purified from E. coli.Enzyme storage buffer： 50mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃), 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100.10X RNase R Reaction Buffer: 200mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 1M KCl, 1mM MgCl2.Inactivation or inhibition： RNase R is heat-inactivated by incubation at 70℃ for 10 minutes.Precautions： RNase R activity is dependent on magnesium ion at a concentration of 0.1-1.0mM. Chelators such as EDTA will significantly reduce the activity of RNase R. If necessary, add MgCl2 additionally in the reaction mixture to a final concentration of 0.1mM at least.This product is for R&D only. Not for drug, household, or other uses.For your safety and health, please wear a lab coat and disposable gloves during the operation.Instructions for Use： 1. Linear RNA digestion with RNase Ra. Set up the reaction on ice as follows:ReagentVolume/ConcentrationRNA＜5µg＞5µg10X RNase R Reaction Buffer2µl5µlRNase R (20U/µl)1-3U/µg RNA1-3U/µg RNADEPC-treated Waterup to 20µlup to 50µlb. Mix the reaction mixture well and incubate at 37℃ for 10-30min.c. Incubate at 70℃ for 10min to terminate the reaction.Note 1: The amount of RNase R and the volume of the reaction mixture need to be optimized through experiments.Note 2: The RNase R digestion product after heat-inactivation can be used directly for RT-PCR and qPCR, etc.2. Purification and recovery of circular RNA by one of the following methods a. Phenol/chloroform extraction followed by ethanol precipitation.(a) Add Nuclease-free Water into the reaction mixture obtained at step 1c to a total volume of 180μl. Add 20μl of 3M sodium acetate (pH 5.2) or 20μl of 5M ammonium acetate, mix well. Add 200μl of phenol/chloroform mixture (1:1), vortex vigorously for 20-30s. Centrifugation at 12000rpm for 5-10min and aspirate the upper layer phase into a new centrifuge tube.(b) Precipitate RNA by adding double volume of absolute ethanol, place at -20℃ for at least 30 minutes, and centrifuge at 12000rpm at 4℃ for 5-10min.(c) Discard the supernatant and wash the pellet with 500μl of ice-cold 70% ethanol to fully remove the salt.(d) Dissolve RNA in DEPC-treated Water and store at -80℃.b. Use RNA purification column or magnetic beads for RNA purification and recovery. References:1. Suzuki, H. et al., Nucl Acids Res. 2006; 34(8):e63.2. Vincent, H.A. and Deutscher, M.P., J Biol Chem. 2006; 281(40):29769. |
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